球根海棠觀賞價(jià)值高,一直是人們喜愛(ài)的花卉品種。但是由于球根海棠的傳統(tǒng)繁殖方法是種子繁殖、扦插、嫁接、分株等方法,繁殖系數(shù)低、苗木質(zhì)量差、繁殖周期長(zhǎng)、品種推廣慢,且受季節(jié)和自然發(fā)育的限制, 嚴(yán)重阻礙了花卉業(yè)在我國(guó)的迅速發(fā)展。但是隨著科技的發(fā)展,球根海棠的繁殖不再僅僅依賴于傳統(tǒng)方法,今天小編就要和您講講球根海棠的組織培養(yǎng)及栽培技術(shù)。
近年來(lái),植物組織培養(yǎng)應(yīng)用于植物的離體快速繁殖, 是日前應(yīng)用最多最廣泛和最有成效的一種技術(shù)。利用組織培養(yǎng)可以在短期內(nèi)進(jìn)行大量繁殖,迅速形成生產(chǎn)規(guī)模,以滿足不斷增長(zhǎng)的廣大鮮花消費(fèi)者及市場(chǎng)的需求。組織培養(yǎng)還可以提高苗木質(zhì)量,使品種純化擾化,加快繁殖速度,提高經(jīng)濟(jì)效益。
1、材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料本試驗(yàn)選取生長(zhǎng)健壯,無(wú)病蟲(chóng)害的完整植株上的成熟莖段作為試驗(yàn)材料。
1.2 培養(yǎng)基以MS 培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基,加入瓊脂6 g/L、蔗糖30 g/L,pH 調(diào)整為5.8,然后加入不同濃度的6-BA 和IBA。
1.3 試驗(yàn)方法
1.3.1 材料處理 取球根秋海棠完整植株,流水沖洗30 分鐘,用75%酒精消毒20 秒鐘,然后用0.1%升汞溶液消毒8 分鐘,再用無(wú)菌水沖洗3 次;將消毒好的植株分割成莖段,接種到培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
1.3.2 初代培養(yǎng) 將處理好的莖段接種到培養(yǎng)基上,每瓶接3 個(gè),共接10 瓶,進(jìn)行初代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)基的配方參考段金玉等的研究, 為MS+6-BA 2 mg/L+IBA 0.5 mg/L。培養(yǎng)溫度保持在25 ℃左右,光照時(shí)間12 小時(shí)。
1.3.3 繼代培養(yǎng) 待球根海棠莖段上芽長(zhǎng)出時(shí), 選擇生長(zhǎng)均勻一致的單芽莖段轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中, 進(jìn)行培養(yǎng), 形成完整植株。在此基礎(chǔ)上確定適宜球根海棠繼代培養(yǎng)的配方, 試驗(yàn)設(shè)計(jì)了3 種繼代培養(yǎng)基的組成:① MS+IBA 0.2mg/L +6-BA 0.2 mg/L;② MS+IBA 0.2 mg/L +6-BA 0.5 mg/L; ③MS +IBA 0.2 mg/L +6 -BA 1mg/L。每個(gè)配方接6 瓶,每瓶接3 個(gè)單芽莖段。培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)條件一致。
1.3.4 生根培養(yǎng) 選擇通過(guò)繼代培養(yǎng)形成完整植株的強(qiáng)壯單株,轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基中,進(jìn)行生根培養(yǎng),在此基礎(chǔ)上確定生根配方,試驗(yàn)設(shè)計(jì)了3 種生根培養(yǎng)基的組成: ① MS+6-BA 0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L; ② MS+6-BA 0.2mg/L+IBA 0.5mg/L;③MS+6-BA 0.2 mg/L + IBA 1 mg/L。每個(gè)配方接6 瓶,每瓶接3 個(gè)單株。培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)一致。
1.3.5 移栽試驗(yàn) 將生長(zhǎng)健壯的完整植株,經(jīng)過(guò)煉苗后, 從瓶?jī)?nèi)取出, 洗凈根部粘著的培養(yǎng)基,盡量全部去除,移入裝有消毒后的基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)缽中,栽前將基質(zhì)拌濕,栽后要澆透水,用塑料薄膜蓋住保溫保濕,待根系恢復(fù)正常生長(zhǎng)后,可去掉塑料薄膜,使之在自然環(huán)境中生長(zhǎng)。
2、結(jié)果與分析
2.1 初代培養(yǎng)基配方對(duì)球根海棠莖段芽萌發(fā)的影響 將經(jīng)過(guò)處理的球根海棠莖段接種到初代培養(yǎng)基上,其中3 瓶莖尖,7 瓶莖段,培養(yǎng)10天時(shí)觀察,芽逐漸開(kāi)始萌發(fā),培養(yǎng)20 天時(shí)觀察,芽幾乎全部萌發(fā)。由于莖尖存在頂端優(yōu)勢(shì),有利于芽的萌發(fā), 所以莖尖芽的萌發(fā)速度要比莖段芽的萌發(fā)速度快一些(見(jiàn)表1)。
表1 不同外植體在初代培養(yǎng)基上芽萌發(fā)情況
由表1 可見(jiàn),培養(yǎng)10 天時(shí),莖尖的發(fā)芽率是44%,莖段的發(fā)芽率是24%;培養(yǎng)20 天時(shí)觀察, 莖尖的發(fā)芽率是100%, 莖段的發(fā)芽率是81%,由此可見(jiàn),莖尖芽的萌發(fā)速度快于莖段芽的萌發(fā)速度。
2.2 繼代培養(yǎng)基配方對(duì)球根海棠增殖率的影響 將初代培養(yǎng)所得的球根海棠的芽苗分割成單芽莖段接種到三種繼代配方基中進(jìn)行培養(yǎng),10 天時(shí)觀察, 差別不是很明顯,40 天后即可觀察到不同繼代培養(yǎng)基配方對(duì)球根海棠叢生芽增殖的情況(見(jiàn)表2)。由表2 可見(jiàn),在相同的培養(yǎng)條件下, 球根海棠的單芽莖段在不同繼代培養(yǎng)基配方中均有增殖, 但對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)情況是有所差異的。其中1 號(hào)配方增殖率為256%,葉片較小;2 號(hào)配方增值率最大,為294%,葉片較之1 號(hào)和3 號(hào)配方最大;3 號(hào)配方增值率最小,為178%,葉片較大。經(jīng)試驗(yàn)證明,2 號(hào)配方最適宜球根海棠的繼代培養(yǎng)。
表2 不同繼代培養(yǎng)基配方誘導(dǎo)叢生芽情況
2.3 生根培養(yǎng)基配方對(duì)球根海棠生根的影響 選取經(jīng)繼代培養(yǎng)后的形成完整植株的強(qiáng)壯單株進(jìn)行生根試驗(yàn), 在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)(見(jiàn)表3)。
表3 不同生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根情況
由表3 可見(jiàn), 不同生根培養(yǎng)基配方對(duì)根的分化促進(jìn)作用是不一樣的。在各配方中,植株均有生根, 其中,1 號(hào)配方植株生根量少且細(xì)弱,無(wú)側(cè)根,促進(jìn)作用表現(xiàn)較弱;2 號(hào)配方,根量多,根比較粗壯且長(zhǎng),有大量側(cè)根,促進(jìn)生根作用明顯;3 號(hào)配方植株根少,但是根粗壯、根較短,也有側(cè)根,對(duì)生根有部分抑制作用。
3、討論
關(guān)于球根海棠組織培養(yǎng)快繁的研究報(bào)道多數(shù)采用葉片作為外植體, 通過(guò)愈傷組織途徑實(shí)現(xiàn)植株再生。王艷萍等研究,這種方式所需時(shí)間較長(zhǎng),再生植株存在一定的變異,愈傷組織經(jīng)多代繼代培養(yǎng)后的再生能力下降。本試驗(yàn)采用莖段作為外植體, 直接誘導(dǎo)芽萌發(fā), 并形成叢生芽,具有繁殖速度快、不易產(chǎn)生變異的特點(diǎn)。
球根秋海棠組培快繁中遇到的關(guān)鍵問(wèn)題是外植體材料帶內(nèi)生菌, 影響了組培苗的增殖及成活。通過(guò)在配制培養(yǎng)基時(shí)加入200 mg/L 青霉素, 并選取不發(fā)生內(nèi)生菌的組培苗繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng),利用此方法有效控制了內(nèi)生菌的發(fā)生,內(nèi)生菌發(fā)生率由60%降到了25%,提高了球根海棠的繁殖效率。
通過(guò)達(dá)克東等研究, 在確定繼代培養(yǎng)配方和生根培養(yǎng)配方的試驗(yàn)時(shí),可以看出,激素濃度過(guò)低,對(duì)于莖段誘導(dǎo)能力較弱,芽萌發(fā)速度慢,叢生芽增殖數(shù)受到了限制,根的長(zhǎng)勢(shì)較弱,根量少;激素濃度過(guò)高,也會(huì)抑制叢生芽的生長(zhǎng),從而降低了叢生芽的增殖數(shù), 雖然刺激了根的加粗,但是根量較少。
莖尖具有頂端優(yōu)勢(shì), 在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)促進(jìn)芽的萌發(fā), 在繼代培養(yǎng)時(shí)可以間接促進(jìn)完整植株的形成,從而縮短育苗時(shí)間;單芽莖段在受到刺激下開(kāi)始萌發(fā),需要一定的啟動(dòng)時(shí)間,所以芽的萌發(fā)速度較慢,在繼代培養(yǎng)中,需要較長(zhǎng)的時(shí)間才能形成完整植株。
劉福平等在研究球根海棠完整植株的移栽時(shí),總結(jié)了幼苗從瓶?jī)?nèi)移栽到外界環(huán)境當(dāng)中,發(fā)生了以下幾種變化:由異養(yǎng)變成了自養(yǎng);由無(wú)菌的生長(zhǎng)環(huán)境變成了有菌的生活環(huán)境; 由恒溫、高濕的環(huán)境變成了變溫、低濕的環(huán)境, 變化非常大。
移栽時(shí),選擇生長(zhǎng)健壯、生根情況適宜的植株進(jìn)行移栽,移栽前進(jìn)行煉苗,為防止透氣過(guò)程中植株干枯,可加入適量的水。移栽前,應(yīng)將基質(zhì)拌濕,用塑料薄膜搭好簡(jiǎn)易拱棚。移栽時(shí),注意在取出植株過(guò)程中,避免傷莖和葉,去除培養(yǎng)基時(shí),盡量清洗干凈,并避免傷根。移栽后充分澆水, 放入已搭好的拱棚內(nèi), 前一個(gè)星期,可適當(dāng)通風(fēng), 但要保持較高濕度, 防止葉片失水干枯。
在移栽試驗(yàn)中,成活率較低,為8.75%。總結(jié)影響移栽成活的原因有4 點(diǎn)。①移栽后經(jīng)歷低溫: 剛移栽的組培苗還未適應(yīng)在自然環(huán)境中生長(zhǎng),就經(jīng)歷低溫,對(duì)于球根海棠的生長(zhǎng)是不利的。②通氣不良,濕度過(guò)大:移栽后放入加有水的盆內(nèi),保證其充分吸水,導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)缽下方不通氣, 拱棚內(nèi)濕度過(guò)大, 使移栽的組培苗發(fā)霉腐爛。③植株受傷:培養(yǎng)在三角瓶?jī)?nèi)的植株,瓶口較小,在取出植株的過(guò)程中,容易傷葉和傷莖,在清洗培養(yǎng)基的過(guò)程中, 培養(yǎng)基不易洗凈且容易傷根。④基質(zhì)帶菌:移栽的基質(zhì)中存在一些病菌,影響球根海棠根系的恢復(fù)。若要保持較高的成活率,應(yīng)根據(jù)球根海棠生理習(xí)性、當(dāng)?shù)氐臍夂蛱攸c(diǎn)、移栽季節(jié)、設(shè)備條件等逐步縮小這種變化,以實(shí)現(xiàn)高成活率、低成本的移栽。
4、結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為,球根海棠最適初代培養(yǎng)配方:MS+6-BA 2 mg/L+IBA 0.5 mg/L;最適繼代培養(yǎng)配方:MS+IBA 0.2 mg/L +6-BA 0.5 mg/L; 最適生根培養(yǎng)配方:MS+6-BA 0.2 mg/L + IBA 0.5mg/L;最適培養(yǎng)溫度保持在25 ℃左右,光照時(shí)間12 小時(shí)。
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